Специальной лаборатории этот вирус назвали. Методы культивирования вирусов в лаборатории, метод индикации репродукции вирусов

Направления деятельности

Направление научной деятельности – инфекционная вирусология и эпидемиология, проблемы вирусных инфекций человека и лабораторных приматов, вирусные гепатиты различной этиологии; разработка моделей наиболее значимых вирусных инфекций человека на лабораторных приматах для изучения нерешенных вопросов патогенеза и иммуногенеза, испытания разрабатываемых средств профилактики и лечения.

Задачи и функции

Работа лаборатории складывается из научно-исследовательского и научно-практического разделов.
Основными задачами научно-исследовательской работы лаборатории являются:
1) Изучение спонтанных вирусных инфекций обезьян желудочно-кишечного и респираторного тракта в сравнительном аспекте с аналогичными инфекциями человека.
2) Изучение специфических маркеров вирусных гепатитов А, Е, С, G у обезьян.
3) Изучение характеристик штаммов вирусных агентов, выделенных от обезьян.
4) Изучение роли рота-, адено-, энтеро-, норо- и других кишечных вирусов в патологии желудочно-кишечного тракта лабораторных приматов. Молекулярно-генетическое изучение штаммов.
5) Изучение эпизоотологических и эпидемиологические аспектов спонтанных вирусных инфекций обезьян.
6) Изучение особенностей формирования гуморального иммунитета при спонтанных гепатитах и других вирусных инфекциях обезьян.
7) Изучение распространенности гепатита Е среди обезьян и населения на неэндемичной территории Юга России (регион Большого Сочи).
8) Изучение противокоревого иммунитета у обезьян Адлерского приматологического центра и населения окружающего региона.
9) Изучение диагностической ценности различных методов и диагностических тест-систем при вирусных инфекциях обезьян.
10) Моделирование на обезьянах вирусных заболеваний человека с целью дальнейшего использования разработанных моделей для изучения вопросов патогенеза, иммунитета, методов лечения и профилактики этих заболеваний.

Научно-производственная функция заключается в следующем:
1) специфическая диагностика вирусных инфекций при возникновении вспышек заболеваний неустановленной этиологии.
2) осуществление серологического и генетического мониторинга вирусных инфекций среди лабораторных приматов и населения окружающего региона с целью эпидемиологического надзора.

Темы исследований

1. Кишечные вирусы лабораторных приматов (2010-2012 гг.). Руководитель и ответственный исполнитель работы: зав. лаб., д.м.н. Корзая Л.И. Исполнители: н.с. Кебурия В.В., м.н.с. Гончаренко А.М.
2. Изучение противокоревого иммунитета у обезьян Адлерского приматологического центра и населения окружающего региона (2013-2014 гг.) Научный руководитель и ответственный исполнитель: зав. лаб., д.м.н., Корзая Л.И.
3. Характеристика штаммов ротавируса лабораторных приматов (2013 – 2015 гг.) Руководитель: Л.И. Корзая. Ответственный исполнитель: Д.И. Догадов.
4. Молекулярно-генетическая характеристика кишечных вирусов, циркулирующих среди обезьян Адлерского приматологического центра (2015-2017 гг.). Руководитель работы и ответственный исполнитель: зав. лаб., д.м.н. Корзая Л.И. Л.И. Исполнители: м.н.с. Догадов Д.И., н.с. Кебурия В.В., м.н.с. Гончаренко А.М.
5. Изучение распространения респираторных вирусов человека среди лабораторных приматов.(2016-2018 гг.). Руководитель и ответственный исполнитель работы: зав. лаб., д.м.н. Корзая Л.И. Исполнители: н.с. Кебурия В.В., м.н.с. Гончаренко А.М.

Результаты

Всесторонне изучен спонтанный и экспериментальный гепатит А у нескольких видов низших обезьян Старого Света (З.В.Шевцова, Л.И. Корзая). Установлено, что по серологическим, вирусологическим, биохимическим и морфологическим проявлениям гепатит А не отличается от одноименного заболевания человека. Установлен новый факт хронизации и длительной персистенции вируса. Спонтанный и экспериментальный гепатит А предложены в качестве модели для изучения аналогичной инфекции человека.
Обнаружено новое явление в инфекционной патологии низших обезьян Старого Света - естественное инфицирование ВГС-подобным вирусом. Охарактеризована новая ВГС-подобная инфекция у макак резусов. Обнаружены не только серологические, но и вирусологические маркеры инфекции (РНК ВГС). Выявлены особенности показателей гуморального ответа к вирусу в сравнительном аспекте с человеком, которые выражались в большом разнообразии вариантов спектра антител в отношении основ¬ных диагностических белков ВГС, преобладании антител к неструктурным белкам вируса, а также невысокой их реактив¬ности. Маркеры ВГС-подобной инфекции обезьян обнаруживались на протяжении нескольких лет. Инфекция протекает практически бессимптомно, сопровождаясь лишь незначительным подъемом уровня аланин-аминотрансферазы без морфологического поражения печени. Полученные данные представляют не только теоретиче¬ское, но и большое практическое значение и являются базой для дальнейшей разработки экспериментальной модели гепатита С на низших обезьянах.
Впервые получены данные о широкой циркуляции вируса гепатита Е не только среди макак Адлерского питомника, но и среди населения окружающей территории – региона Большого Сочи. Выявление анти-ВГЕ IgM в сыворотках людей свидетельствует о наличии случаев острого ГЕ на неэндемичной по ГЕ территории. Процент обнаружения анти-ВГЕ среди обслуживающего персонала питомника оказался значительно ниже, чем среди населения окружающего региона, что предполагает наличие иного источника ВГЕ-инфекции для человека, нежели обезьяны.
Выявлена инфицированность лабораторных приматов кишечными вирусами (рота-, энтеро-, адено-, ВГА, ВГЕ). Большинство вирусных инфекций протекало бессимптомно, сопровождаясь лишь лабораторными признаками. Показана определенная роль ротавируса, аденовируса и энтеровируса при заболеваниях желудочно-кишечного тракта обезьян, а также вирусоносительство у «клинически» здоровых животных. У погибших обезьян с диареей (макаки резусы) более чем в половине случаев (58,3%) наблюдалась микст-инфекция, ассоциированная с кишечными вирусами. У клинически здоровых животных микст-инфекция обнаруживалась почти в 5 раз реже (12,5%). Показана различная чувствительность коммерческих тест-систем при обнаружении ротавируса и аденовируса в материалах от обезьян. Методы детекции кишечных вирусов (ПЦР, ИФА, РНГА, РТНГА) внедрены в практику лаборатории инфекционной вирусологии для выяснения этиологии диарейных заболеваний у обезьян, что позволит избежать необоснованного применения антибиотиков и других лекарственных препаратов.
Выявлена крайне низкая степень противокоревого иммунитета среди обезьян Адлерского приматологического центра (14,9±1,6% за счет особей старше 22 лет). Показано отсутствие циркуляция вируса кори среди обезьян с 1993 года. Появление источника инфекции среди неиммунных обезьян (85,1%) может привести к возникновению вспышки кори. При обострении эпидемической ситуации по кори предлагается проведение вакцинации серонегативных обезьян.
Получены важные данные при изучении иммуноструктуры к вирусу кори молодого населения г. Сочи (индикаторная группа в возрасте от 18 – до 35 лет). Отсутствие иммунитета к кори у 42,2±7,4% студентов РУДН (18-25 лет) и низкий уровень антител к вирусу у подавляющего большинства остальных лиц этой группы свидетельствует о неблагополучной ситуации по кори среди восприимчивого контингента. Среди сотрудников НИИ МП также зарегистрировано 14,5% серонегативных к вирусу кори лиц, а в возрасте до 35 лет - 22,2%. Наличие серонегативных лиц требует проведения вакцинации против кори.

Научные исследования сотрудников лаборатории инфекционных вирусов с 2002 года поддерживаются грантами Российского фонда фундаментальных исследований (РФФИ) и РФФИ-ЮГ.
В лаборатории проводится подготовка специалистов вирусологов через аспирантуру.
Сотрудники лаборатории осуществляют научно-педагогическую работу в Сочинском филиале Российского университета дружбы народов на кафедрах физиологии, медицинской ветеринарии и ветеринарно-санитарной экспертизы. Проводится курс лекций и практических занятий по дисциплинам «Вирусология», «Микробиология», «Биологическая безопасность в лабораториях». На базе лаборатории выполняются дипломные работы.
В лаборатории проводятся договорные НИИ по доклиническому испытанию вакцин.

Персонал

• Корзая Лидия Ивановна – зав. лаб., д.м.н.
• Кебурия Виктория Велодиевна – н.с.
• Догадов Дмитрий Игоревич – н.с.
• Гончаренко Александра Михайловна – м.н.с.

Основные публикации

1. Корзая Л.И., Шевцова З.В., Лапин Б.А., Дьяченко А.Г., Крылова Р.И. Получение и характеристика культуральных штаммов вируса гепатита А от человека и обезьян. Вопр. вирусол., 1997, №2, c. 60-63.
2. Корзая Л.И., Лапин Б.А., Шевцова З.В., Крылова Р.И., Эсванджия Н.Ч. Характеристика экспериментальных моделей гепатита А на павианах гамадрилах. Вопр. вирусол., 1998, №2, с.67-70.
3. Корзая Л.И., Шевцова З.В., Лапин Б.А., Крылова Р.И., Джелиева З.Н. Повторная инфекция при гепатите А у макак резусов в эксперименте. Вопр. вирусол., 1998, №4 , с. 158-163.
4. Лапин Б.А., Джикидзе Э.К., Крылова Р.И., Корзая Л.И., Гвоздик Т.Е., Джелиева З.Н., Симаванян К.В., Кукава Г.Г. Спонтанное заболевание обезьян неизвес¬тной этиологии. Baltic. J. Lab. Anim. Sci., 1999, P.19-28.
5. Korzaya L.I., Lapin B.A., Shevtsova Z.V., Krilova R.I. Spontaneous and experimental hepatitis A in Old World monkeys are the models of human hepatitis A. // J. Lab. Anim. Sci., 2001, 11(2), P. 135-141.
6. Корзая Л.И., Лапин Б.А., Кебурия В.В., Чикобава М.Г. Естественное инфицирование приматов вирусом гепатита С. // Бюл. Экспер. Биол. – 2002. – .Т. 133, № 2. - С. 211-214.
7. Лапин Б.А., Шевцова З.В., Корзая Л.И., Крылова Р.И. Спонтанный и экспериментальный гепатит А у низших обезьян Старого Света и их использование для изучения этой инфекции. // Мир вирусных гепатитов. - 2006. - №6. - С. 3-9.
8. Корзая Л.И., Кебурия В.В., Лазарева И.Я., Лапин Б.А. Вирусные гепатиты (А, Е) у лабораторных приматов. Эпидемиологические аспекты проблемы. // В кн.: Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии в опытах на обезьянах. Материалы международной научной конференции. 19-22 сентября 2007 года, Сочи-Адлер. – 2007. - С. 94-103.
9. Кебурия В.В., Корзая Л.И., Крылова Р.И., Лапин Б.А. Длительное динамическое наблюдение за HCV-позитивными макаками Адлерского приматологического центра. // В кн.: Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии в опытах на обезьянах. Материалы международной научной конференции. 19-22 сентября 2007 года, Сочи-Адлер. – 2007. - С. 132-141.
10. Корзая Л.И., Лапин Б.А., Кебурия В.В., Лазарева И.Я. Частота выявления антител к вирусу гепатита Е у обслуживающего персонала и у макак Адлерского питомника. // Вопр. вирусол. – 2007. - С. 36-40.
11. Корзая Л.И., Кебурия В.В., Лазарева И.Я, Лапин Б.А. Частота распространения антител к вирусу гепатита Е среди населения Адлерского региона и обезьян приматологического центра. // В кн.: Вирусные гепатиты – эпидемиология, диагностика, лечение и профилактика. Материалы YII Российской научно-практической конференции с международным участием. 29-31 мая 2007 г., Москва. – С. 113-114.
12. Корзая Л.И., Кебурия В.В., Лазарева И.Я. Анализ обнаружения маркеров гепатита Е у обезьян Адлерского питомника. // В кн.: Вклад фундаментальных исследований в развитие современной инновационной экономики Краснодарского края. Конференция грантодержателей регионального конкурса Российского фонда фундаментальных исследований и администрации Краснодарского края “ЮГ РОССИИ”. Сборник тезисов. – Краснодар 2007. – С. 146-148.
13. Кебурия В.В., Корзая Л.И. Спонтанная HCV- подобная инфекция лабораторных приматов. // Материалы Y научно-практической конференции молодых ученых и студентов юга России. «Медицинская наука и здравоохранение». Краснодар 2007. – С. 37-40.
14. Корзая Л.И., Кебурия В.В., Гончаренко А.М. Маркеры энтеральных гепатитов Е и А у населения Адлерского региона и обезьян приматологического центра. // Тезисы Четвертой международной конферкнции, посвященной 85-летию Санкт- Петербургского НИИЭМ Пастера и 120-летию Парижского института Пастера. Санкт-Петербург, 2-4 июня 2008. С. 32.
15. Корзая Л.И., Кебурия В.В., Лазарева И.Я., Гончаренко А.М. Анализ обнаружения маркеров гепатита Е у обезьян Адлерского питомника. // В кн.: Вклад фундаментальных исследований в развитие современной инновационной экономики Краснодарского края. Конференция грантодержателей регионального конкурса Российского фонда фундаментальных исследований и администрации Краснодарского края “ЮГ РОССИИ”. Сборник тезисов. – Краснодар 2008. – С.56.
16. Корзая Л.И., Кебурия В.В., Гончаренко А.М., Лапин Б.А. Эпидемиологические аспекты изучения вирусного гепатита Е человека и лабораторных приматов. // Материалы II Ежегодного Всероссийского конгресса по инфекционным болезням. – Москва, 29-31 марта 2011 г. С. 154.
17. Корзая Л.И., Кебурия В.В., Гончаренко А.М., Лапин Б.А. Молекулярная диагностика энтеровирусных инфекций у обезьян. // В сб. трудов VII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика - 2010». – Москва, 24-26 ноября 2010 г.,

Научные работы за 5 лет

1. Корзая Л.И., Кебурия В.В., Гончаренко А.М., Догадов Д.И., Лапин Б.А. Маркеры вирусных инфекций у лабораторных приматов. //В кн.: Фундаментальные и прикладные аспекты медицинской приматологии. Материалы второй международной научной конференции. Том 1. (8-10 августа 2011 года, Сочи-Адлер). – 2011. - С. 79-88.
2. Кебурия В.В., Корзая Л.И., Гончаренко А.М., Гвоздик Т.Е. Изучение роли вирусных агентов в патологии желудочно-кишечного тракта обезьян. //В кн.: Фундаментальные и прикладные аспекты медицинской приматологии. Материалы второй международной научной конференции. Том 1. (8-10 августа 2011 года, Сочи-Адлер). – 2011. - С. 216-221.
3. Корзая Л.И., Кебурия В.В., Догадов Д.И., Лапин Б.А. Энтеральные вирусные инфекции лабораторных приматов. // Материалы IY Ежегодного Всероссийского конгресса по инфекционным болезням. – Москва, 26-28 марта 2012 г., С.186.
4. Корзая Л.И., Догадов Д.И., Кебурия В.В., Лапин Б.А. Ротавирусы лабораторных приматов. Материалы V Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням, 25-27 марта 2013 г. Москва, с. 208-209.
5. Догадов Д.И., Корзая Л.И., Кебурия В.В. Определение аденовирусов у лабораторных приматов методом полимеразной цепной реакции. Материалы V Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням, 25-27 марта 2013 г. Москва, с. 129.
6. Корзая Л.И., Кебурия В.В., Догадов Д.И., Лапин Б.А.Сравнительное изучение серологических маркеров энтеральных вирусных гепатитов у макак резусов (Macaca mulatta). // Материалы VI Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням, 24-26 марта 2014 г. Москва, с. 146.
7. Корзая Л.И., Догадов Д.И., Кебурия В.В., Лапин Б.А. Изучение эпидемиологических аспектов кори на модели естественной инфекции лабораторных приматов. // Материалы VI Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням, 24-26 марта 2014 г. Москва, с. 146-147.
8. Догадов Д.И., Корзая Л.И., Кебурия В.В. Молекулярно-генетические маркеры кишечных вирусных инфекций лабораторных приматов. //В сб. трудов YIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. – Москва, 2014. - Том I. – С.385.
9. Лапин Б.А., Джикидзе Э.К., Яковлева Л.А., Еорова Т.П., Корзая Л.И. Болезни обезьян, опасные для человека. Правила содержания и работы с обезьянами в карантине при поступлении животных из внешних источников, а также при экспериментальном инфицировании.// Методические рекомендации – М. – 2014. С. 52.
10. Догадов Д.И., Корзая Л.И., Кебурия В.В. Молекулярно-генетические маркеры кишечных вирусных инфекций лабораторных приматов. //В сб. трудов YIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. – Москва, 2014. - Том I. – С.385.
11. Догадов Д.И., Корзая Л.И., Кюрегян К.К., Карлсен А.А. Выявление вируса гепатита А у зеленых мартышек (CHLOROCEBUS PYGERYTHRUS), прибывших из мест естественного обитания (Танзания). // Медицинская вирусология, том ХХIХ (2). Приложение. Материалы конференции, посвященной 60-летнему юбилею Института полиомиелита и вирусных энцефалитов имени М.П. Чумакова. (8-9 декабря 2015 года). Москва, 2015. С. 84.
12. Корзая Л.И., Кебурия В.В., Догадов Д.И., Лапи Б.А., Кюрегян К.К., Михайлов М.И.Маркеры гепатита Е у населения Большого Сочи и обезьян Адлерского приматологического центра. // Вопр. вирусол, 2015 (принята к печати!)

Лаборатории микробиологического профиля входят в состав центров госанэпиднадзора (ЦГСЭН), инфекционных и крупных больниц, кожно-венерологических и туберкулезных диспансеров. В зависимости от ведомственной принадлежности, в бактериологических, вирусологических, микологических и пр. лабораториях проводится диагностическая работа, которая регламентируется соответствующими инструкциями и законодательствами. В соответствии с этими актами законодательств, каждая из лабораторий может работать только с определенными группами микроорганизмов.

Бактериологические лаборатории ЦГСЭН работают с микробами III и 1У групп, проводя этиологическую диагностику инфекционных заболеваний воздушно-капельного, кишечного, гнойно-воспалительного и пр. характера.

Вирусологические лаборатории проводят вирусологическую диагностику заболеваний, вызванных вирусами (грипп, полиомиэлит, герпес и др.), а также - хламидиями (орнитоз, мочеполовые заболевания и пр.) и риккетсиями (Ку-лихорадка, сыпной тиф и пр.).

Лаборатории особо-опасных инфекций проводят диагностику особо-опасных инфекций микробной (чума, холера, сибирская язва, бруцеллез, туляремия и др.), а некоторые из них и вирусной этиологии (Марбург, Эбола, натуральная оспа и др.). Работа проводится по особо строгим регламентациям.

Кожно-венерологическая группа заболеваний и туберкулез диагносцируется в соответствующих диспансерах.

Бактериологические лаборатории ЦГСЭН должны размещаться в типовых зданиях или помещениях, рассчитаных на проводимый объем работы, соответственно назначению. В каждой баклаборатории должен быть предусмотрен полный набор необходимых для них подразделений: регистратура для приема анализов и выдачи результата, боксы для работы с бактериями разных групп, помещение для проведения иммунодиагностических и молекулярно-генетических анализов, помещения для приготовления питательных сред, стерилизации, мойки, возможен виварий с боксами для здоровых и подопытных животных.

Каждое помещение оборудовано соответствующим оборудованием и аппаратурой.

В стерилизационной должен находится стерилизатор паровой, определенной модели - вертикальный или горизонтальный и пр.

Из оборудования для выращивания, хранения микроорганизмов и другой работы необходимо иметь:

Холодильники, для раздельного хранения культур и других биологических препаратов, согласно инструкции.

Центрифуги, для осаждения корпускулярных веществ, в том числе - микроорганизмов. Центрифуги должны иметь охлаждение.

Термостаты, для выращивания культур бактерий при заданной температуре.

Микранаэростаты, для выращивания в бескислородных условиях бактерий, называемых анаэробами.

Дистиллятор, для получения дистиллированной воды.

Аппарат для изготовления ватно-марлевых пробок разных размеров.

В боксовых комнатах необходимо иметь: биологические иммерсионные микроскопы (к ним - осветитель фазово-контрастного устройства, конденсор темнопольный), водяные бани, холодильники, набор инструментов (бактериологические петли, иглы, скальпели, пинцеты, шпатели и пр.), наборы красителей, спирт, реактивы, фильтровальная бумага, карандаши для надписей по стеклу, кислоты, щелочи, спиртовки и газовые горелки. Банки с дез.раствором (подписанные, с датой приготовления данного дез.раствора). Лабораторная посуда: пипетки, пробирки, колбы, флаконы, чашки Петри, матрацы, пастерки и пр.

Лаборатория должна иметь определенный запас коммерческих питательных сред, тест- систем и сывороток диагностических, разнообразных наборов диагностических препаратов.

Некоторые правила работы в микробиологических лабораториях:

1. Все сотрудники работают в медицинских халатах, шапочке, тапочках. В случае необходимости надевают маску.

2. В лаборатории запрещается курить, принимать пищу, пить воду, за исключением, в специально отведенных местах.

3. Рабочее место содержится в образцовом порядке.

4. При попадании инфицированного материала на стол, пол или иную поверхность, необходимо обработать это место дезинфицирующим раствором.

5. Хранение, пересылка, выдача культур микроорганизмов производится согласно предписанию.

6. По окончанию работы руки тщательно моют с мылом. При необходимости руки можно обработать одним из дез.растворов и пр.

Вирусологические лаборатории. Они должны быть полностью изолированными от других подразделений. В структуре вирусологических лабораторий имеются определенные различия, в зависимости от специализации, но есть основные подразделения: морозильнаякамера, мойка, дезинфекционная, чистых культур клеток и зараженных, боксы для работы с вирусами, комната для иммунодиагностических исследований, виварий, комната для куриных эмбрионов – чистых и зараженых.

Вирусологическая лаборатория должна иметь: раздевалку - для смены одежды, обуви, кафельные полы, покрытые линолиумом. Затянутые сеткой окна. Ультрафиолетовые лампы. Необходимы холодильники - на 4 о С и ультрахолодильник на -20-40 о С и более, фарфоровые ступки, гомогенизаторы, пестики, нструментарий (ножницы, иглы, шприцы, скальпели, пинцеты и пр.). Центрифуги с охлаждением до 5-6 тыс об. и ультрацентрифуги до 30 тыс. об. в мин и более. Люминисцентный микроскоп. Инкубаторы на 37 о С, с целью содержания в них куриных эмбрионов и нструментария для работы с ними. Термостаты с автоматическим параметрами, для инкубирования зараженных куриных эмбрионов. Стеклянная посуда и штативы для пробирок, горелки и пр.

Некоторые правила работы в вирусологических лабораториях:

1. Вход в вирусологическую лабораторию разрешен только работникам. Переодевание обязательно в специальную одежду, согласно с выполняемой работой (халат, колпак, обувь).

2. Перед входом обязательно иметь коврик, смоченный дез.раствором.

3. Все виды работ с зараженным или предпологаемым на заражение материалом следует проводить строго в соответствии с инструкцией.

4. Работа в боксах обязательна с дополнительными атрибутами в одежде:маска, двойной халат, перчатки, полотенце, защитные очки и пр.

6. В случае «аварии» (разбрызгивание вируссодержащего материала) следует вызвать заведующего или другого врача (не выходя из бокса, нажав на кнопку звонка) и провести вдвоем обеззараживание согласно инструкции.

7. В нобходимых случаях проходить вакцинацию, согласно инструкции.

8. Отработанный вируссодержащий материал уничтожают автоклавированием при 1,5 атм в течение 30 мин.

9. После завершения работы следует переодеться в предбокснике в обычный халат и обувь, колпак или косынку, вымыть руки с мылом, при необходимости продезинфицировать.

10. Боксы перед работой обрабатывают парами формалина, ультрафиолетовым светом. После работы обрабатывают 2 % раствором хлорамина и др.

Правила работы студентов на кафедре микробиологии и вирусологии:

1. Обязанности дежурных:

Вместе с лаборантом проверить наличие и количество инструментария (бактериальные петли, пинцеты и пр.), материала, предназначенного для занятий (пробирки и чашки с посевами, карандашей для надписей по стеклу, бумажек с генцианвиолетом, красителей и пр.), состояние микроскопов, предметных и покровных стекол и пр. Сделать записи в соответствующий журнал для дежурных. Принять учебный материал от лаборанта и раздать студентам. Принять поштучно чашки и пробирки с посевами микроорганизмов.

По окончанию занятий дежурный проверяет состояние рабочих столов, устраняет все дефекты их уборки, проверяет наличие инструментария, микроскопов и пр. Пробирки и чашки с посевами поштучно сдает лаборанту, заполняет тетрадь дежурного, сдает комнату лаборанту, выключает свет.

2. Обязанности студентов:

Перед началом работы . Надеть медицинский халат, застегнуть его, надеть шапочку или косынку. Портфели и книги положить в ящик стола или в пакеты. Проверить состояние рабочего стола и микроскопа. На рабочий стол положить тетрадь, ручку, карандаши, в том числе – цветные.

Во время работы . Бережно обращаться с микроскопом, посудой, инструментарием и пр. Внимательно относиться ко всем этапам работы с культурами бактерий. Подписывать посуду с микробами. Стерилизовать петлю по окончанию работы с культурами. При аварии (загрязнения заразным материалом поверхности стола, пола, одежды, кожи и пр.) сообщить о случившемся преподавателю и совместно устранить загрязнение.

После работы . Привести в порядок рабочее место. Засеянные чашки, пробирки сдать дежурному. Отработанный материал сдать дежурному. Все использованные инструменты следует прожечь над огнем спиртовки, стекла опустить в банки с дез.раствором. Привести в порядок микроскоп и рабочий стол. Тщательно вымыть руки с мылом.

Входить и работать в учебных комнатах без халата или колпачка. Принимать пищу в помещениях кафедры. Курить, сорить. Класть на стол и подоконники портфели, шапки, учебники. Портить оборудование. Пачкать столы. Громко разговаривать и смеяться, бегать и мешать в работе кафедры.

ВИРУСОЛОГИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯ - учреждение, занимающееся изучением вирусов и вирусных заболеваний или производством вирусных препаратов (вакцин, диагностикумов, противовирусных иммунных сывороток и т. п.).

В. л. отделились от бактериологических и стали существовать в виде самостоятельных единиц в 20 в. В СССР первые В. л. были созданы в 30-х годах. Сейчас в стране имеется несколько ин-тов мед. вирусологии, объединяющих В. л. различных профилей, где изучаются вирусные заболевания, исследуется природа вирусов, разрабатываются и производятся вирусные препараты (Ин-т вирусологии им. Д. И. Ивановского, Ин-т полиомиелита и вирусных энцефалитов, Всесоюзный НИИ гриппа, Московский НИИ вирусных препаратов и др.). В. л. есть также в большинстве союзных и республиканских ин-тов микробиологии и эпидемиологии, обычно профилированных в отношении изучения одного или нескольких заболеваний. Кроме того, имеется ок. 150 В. л. при республиканских, областных и городских сан.-эпид, станциях, а также лаборатории при крупных леч. учреждениях; в основном они занимаются диагностической работой. Помимо мед. В. л., существуют лаборатории для изучения вирусных инфекций животных и растений.

Размеры и штаты В. л. зависят от назначения и объема работы. Во всех случаях обязательно обеспечение безопасности персонала и возможности проведения работы в стерильных условиях.

В. л. состоит из собственно лаборатории и подсобных помещений - для обработки и стерилизации посуды, приготовления питательных сред (для выращивания клеточных культур, выявления бактерий и мико-плазм), лиофилизации вирусов, инкубатора, вивария и др. Если В. л. входит в состав более крупного учреждения (ин-та, сан.-эпид, станции и др.), подсобные помещения могут быть общими для ряда лабораторий или всего учреждения.

Собственно В. л. строится по типу бактериологической лаборатории (см.) с учетом специфики работы - выращивания клеточных и тканевых культур, ультрацентрифугирования, хранения вирусов при низких температурах и др. Она оборудуется для диагностической работы (выделения вирусов и серологических реакций), для изучения свойств вирусов, их структуры, проведения генетических исследований и т. п.

Помещение В. л. должно легко мыться и обрабатываться дезинфицирующими растворами. С этой целью стены красят масляной краской или облицовывают плиткой, пол покрывают линолеумом или плиткой. Помещение оборудуют приточно-вытяжной вентиляцией примерно с 10-кратным обменом воздуха; оно должно быть обеспечено холодной и горячей водой, а также светильным газом. Желательно иметь централизованную систему сжатого воздуха (давление до 1,0-1,2 атм) и вакуума (до 700- 760 мм рт. ст. остаточного давления). Должны быть предусмотрены душевые комнаты для сотрудников. При работе с особо опасными вирусами необходимо обезвреживание (путем кипячения) сточных вод.

В В. л. обязательно наличие отдельного помещения для стерильной работы, состоящего из двух отделений, разделенных стеклянной перегородкой. Внутреннее помещение - бокс- должно быть небольшим (6-8 м 2), с низким потолком (см. Боксы , микробиологические). Дверь должна открываться в предбоксник, служащий для одевания дополнительной одежды, отделенный второй перегородкой от остального помещения. Для стерилизации бокса и предбоксника используют бактерицидные лампы из увиолевого стекла с преобладающей длиной волны 254 нм (см. Бактерицидные облучатели). Для этой цели можно использовать лампы БУВ, которые устанавливают из расчета 2-2,5 вт на 1 м 3 помещения; средний срок службы лампы 1500 час. Обязательно обеспечение боксов стерильным воздухом за счет приточной вентиляции при 4-5-кратном обмене; для стерилизации воздуха могут быть использованы фильтры ЛАИ К из ткани Петрянова - тип ФПП.

В боксе должны находиться лишь необходимые для работы инструменты и посуда, стерилизатор для инструментов, широкогорлые банки с дезинфицирующим раствором, бак с крышкой для зараженного материала. При работе с возбудителями особо опасных инфекций (натуральная оспа, энцефалиты и т. д.) в боксе устанавливают дополнительно настольный бокс, в к-ром стерилизуется путем фильтрации как поступающий, так и оттекающий воздух. Основные правила работы с особо опасными возбудителями регламентируются специальной инструкцией.

Для дезинфекции в В. л. используют чаще всего лизол 1 - 5%, хлорамин 1-5%, формалин 2,5-5%.

Помимо обычной бактериологической посуды, В. л. должны иметь гомогенизатор для измельчения тканей, магнитные мешалки, микроскопы (световые для исследования в обычном и ультрафиолетовом свете, а также электронные), центрифуги различной мощности (на 3-5 тыс. об/мин, а также с охлаждением на 12-15 тыс. и 60 тыс. об/мин), имеющие набор роторов. Необходимы термостаты, одновременно работающие при различной температуре (от 25 до 40°), в т. ч. с подачей углекислого газа, или термостатные комнаты. В. л. оборудуется рефрижераторами или холодильными камерами с t° +4°, -20° и -40°. Для хранения культур клеток необходимы сосуды Дьюара с жидким азотом или холодильники с температурой ниже -90°.

Лаборатории, изучающие биохимию вирусов, оборудуются по типу химических. Работа с радиоактивными изотопами производится в специально оборудованном помещении.

В отделениях по приготовлению сред, помимо обычной хим. посуды, необходимо иметь установки для обработки воды, к-рая дважды дистиллируется в стеклянных аппаратах или деионизируется на колонках с ионообменными смолами. Для стерилизации растворов, которые нельзя автоклавировать, используют асбестобумажные стерилизующие пластины Зейтца, вмонтированные в фильтры типа Сальникова (Ф-140, ФС-3, ФС-7 и т. п.); фильтрация осуществляется при давлении 0,5 атм. С той же целью можно использовать стеклянные пластины (свечи) и фильтры «Миллипор» с величиной пор от 0,22 до 1,2 мкм (см. Бактериальные фильтры).

Виварий (см.) должен быть отделен от помещения собственно В. л. В нем необходимо иметь комнаты для карантина поступающих животных, для их заражения и отдельно для вскрытия. Работа с мелкими лабораторными животными производится за защитным стеклом. Обеззараживание клеток для содержания животных лучше производить паром. Необходимо также иметь крематорий для сжигания трупов животных и мусора.

Библиография: Кравченко А. Т. Принципы организации и режим работы вирусологических и риккетсиозных лабораторий, Руководство по Лаборат, диагностике вирусных и риккетсиозных болезней, под ред. П. Ф. Здродовского и М. И. Соколова, с. 219, М., 1965; Лабораторная диагностика вирусных и риккетсиозных заболеваний, под ред. Э. Леннета и Н. Шмидт, пер. с англ., с. 9, 123 и др., М., 1974; Guide to the laboratory diagnosis of smallpox for smallpox eradication programmes, Geneva, WHO, 1969; Virologische Praxis, hrsg. v. G. Starke, Jena, 1968, Bibliogr.

В вирусологической лаборатории проводят работу по выделению штаммов вирусов, их идентификации и культивированию, выполняются различные научные исследования. При работе с вирусами необходимо прежде всего:

1. Не допустить загрязнения штаммов вирусов посторонней микрофлорой;

2. Обеспечить безопасность работающего персонала от возможного заражения вирусами;

3. Обеспечить безопасность окружающего населения от заражения вирусными инфекциями через сточные воды, трупы экспериментальных животных и т.п.

При исследовании материалов, полученных от больных вирусными инфекциями, с целью лабораторной диагностики этих заболеваний применяются различные методы:

· Методы электронной и в меньшей степени световой микроскопии;

· Методы выделения и культивирования вирусов в культурах клеток;

· Методы выделения и культивирования вирусов в развивающихся куриных эмбрионах и в организме чувствительных экспериментальных животных;

· Выявление вирусов по их гемагглютинирующей способности;

· Различные серологические методы исследования: традиционные и экспресс-методы;

· Молекулярно-генетические методы исследования – молекулярная гибридизация и полимеразная цепная реакция.

1.1.2. Материалы, исследуемые при вирусных инфекциях

При взятии инфекционного материала от людей и животных необходимо учитывать тропизм вирусов к определённым тканям и органам, пути выделения вируса во внешнюю среду и особенности патогенеза той или иной вирусной инфекции.

Различают пневмотропные, энтеротропные, гепатотропные, лимфотропные, нейротропные и дермотропные вирусы. В зависимости от тропизма исследованию подвергают различные материалы. Например, исследуют слизь из зева, мокроту и т.п., если виру пневмотропный; испражнения – при энтеротропных вирусах; жидкость из визикул или пустул, корочки – если вирус обладает дермотропностью и т.д.

1.1.3. Обработка вируссодержащего материала

Инфекционные материалы, взятые с учётом тропизма вирусов и с соблюдением асептики, помещают в стерильную посуду, тщательно закупоривают её и направляют в лабораторию, поместив в термос со льдом.

Материал рекомендуется исследовать в кратчайший срок, так как вирусы быстро инактивируются. Сохранению вируса способствует помещение исследуемого материала (в 50%-ном растворе глицерина) в холодильник при температуре не выше 5 о С. Но самый надёжный способ – это хранение в замороженном состоянии при температуре -45 о С и ниже; в таких условиях вирус может оставаться жизнеспособным длительное время.

Обработка плотного материала, содержащего вирусы, начинается с растирания его в ступке или измельчения в специальных аппаратах – гомогенизаторах. Затем готовится 10%-ная взвесь в солевом растворе, которую центрифугируют при 2000-3000 об/мин в течение 15-30 минут для осаждения крупных частиц. Вирусы остаются в надосадочной жидкости, которую и подвергают дальнейшему исследованию.

Жидкий вируссодержащий материал непосредственно центрифугируют и также получают надосадочную жидкость.

Если есть сомнения в бактериологической стерильности исследуемой вируссодержащей надосадочной жидкости, к ней добавляют антибиотики, чтобы уничтожить посторонние микроорганизмы. Антибиотики не влияют на вирусы, и они сохраняют свою жизнеспособность.

1.1.4.Микроскопические методы исследования в вирусологии

- Электронная микроскопия

Электронноскопические препараты готовят из очищенных и концентрированных вируссодержащих взвесей или ультратонких срезов тканей, заражённых вирусами. Вирусные объекты наносят на специальные плёнки-подложки, помещённые на опорные сеточки. Плёнки-подложки должны быть очень тонкими (не более 30 нм толщины), прозрачными и достаточно прочными, например, коллоидийно-угольные. Плёнки наносят на поддерживающие сеточки из меди (диаметром 2-3 мм) с многочисленными отверстиями. Далее препараты обрабатывают различными способами.

Методы напыления металлами применяют для получения контрастных препаратов. Пары тяжёлых металлов (золота, платины, урана и др.), образующиеся в специальном приборе в условиях вакуума и высокой температуры, направляют под острым углом на вируссодержащий препарат. Вирусы оказываются покрытыми тонким слоем металла.

Метод негативного контрастирования основан на том, что при обработке препарата некоторыми солями тяжёлых металлов, например, 1-2%-ным раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты, создаётся более плотный слой, не пропускающий электроны, а котором хорошо видны более электроннопрозрачные исследуемые объекты.

Метод ультратонких срезов в сочетании с негативным контрастированием является наилучшим для изучения тонкого строения вирионов и изучения этапов взаимодействия вирусов с клеткой, но в то же время он наиболее сложен. Исследуемые кусочки инфицированной ткани или другого вируссодержащего материала фиксируют в специальном фиксаторе (например, осмиевом). Обезвоживают путём последовательного помещения в спирты возрастающей крепости. Заливают образцы специальной пластмассой, после полимеризации которой образуются твёрдые прозрачные блоки. Из блоков готовят ультратонкие срезы толщиной 10-20 нм на специальном микротоме, Полученные срезы контрастируют, помещая в раствор фосфорно-вольфрамовой кислоты.

Приготовленные вышеописанными способами препараты изучают в просвечивающем электронном микроскопе, разрешающая способность которого достигает 0,2-0,3 нм. Изображение препарата наблюдают на флюаресцирующем экране электронного микроскопа и фотографируют специальные фотопластинки, с которых получают отпечатки. Получаемые увеличения: ×100000-×400000.

Сканирующая электронная микроскопия осуществляется с помощью сканирующего электронного микроскопа, в котором тонкий пучок электронов быстро перемещается по исследуемому объекту, то есть сканирует его поверхность. В результате возникает излучение вторичных электронов, которое, проходя через катодно-лучевую трубку, преобразуется в объёмное изображение объекта на флюоресцирующем экране.

Сканирующая микроскопия позволяет получать трёхмерное изображение вирионов (предварительно препарат напыляют металлами), различать детали строения их поверхности, но не выявляет их внутреннюю структуру. Разрешающая способность сканирующего микроскопа равна 7-20 нм.

- Световая микроскопия

В световом микроскопе можно увидеть крупные вирусы, размеры которых находятся в пределах разрешающей способностимикроскопа - не менее 0,2 мкм. А также внутриклеточные включения в поражённых вирусом тканях.

Крупные вирусы, например, поксвирусы, и включения обнаруживают с помощью специальных методов окраски, в фазовом контрасте, в тёмном поле зрения; применяют и люминесцентную микроскопию.

Крупные вирусы выявляют путём окраски по Морозову (серебрением). Для выявления внутриклеточных включений приготавливают гистологические срезы из поражённых тканей, препараты-мазки или отпечатки. Обычно препараты окрашивают по Романовскому-Гимзе, иногда другими методами. Наибольшее практическое значение имеет обнаружение включений Бабеша-Негри в нервных клетках головного мозга при бешенстве. Для этого препараты окрашивают по Манну.

Люминесцентная микроскопия. Препараты, приготовленные из материалов, содержащих крупные вирусы, внутриклеточные включения, скопления вирусных антигенов, окрашивают растворами флюорохромных красителей. При люминесцентной микроскопии в УФ-свете окрашенные акридин-оранжевым скопления РНК-геномных вирусов и образуемые ими включения видны как светящиеся красные гранулы на фоне бледно-зелёной цитоплазмы клеток; ДНК-геномные вирусы дают изумрудно-зелёное свечение.

Иммунофлюоресцентный метод основан на соединении вирусов, внутриклеточных включений, скоплений вирусных антигенов со специфическими противовирусными антителами, меченными флюорохромными красителями. Образовавшиеся комплексы дают свечение при люминесцентной микроскопии.

Группа канадских ученых из университета Альберты в Канаде провела довольно рискованный эксперимент, в результате которого смогла воскресить вымерший вид лошадиной оспы, не опасной для человека. Это оказалось сравнительно просто и дешево и вызвало предсказуемый приступ паники у обывателей.

Вирусы лошадиной оспы — родственники черной оспы, которая унесла порядка полумиллиона жизней в прошлом столетии, хотя и была известна человечеству тысячи лет. Для победы над вирусом черной оспы ученым понадобились столетия и огромные деньги и усилия. Канадским ученым во главе с вирусологом Дэвидом Эвансом (David Evans) удалось восстановить вирус методами генной инженерии всего за 100 000 долларов. Для воссоздания вируса ученые использовали исходники, которые были доставлены обычной почтой. Команда приобрела перекрывающиеся фрагменты ДНК, каждая из которых насчитывает около 30 000 пар оснований, у компании Geneart (Регенсбург, Германия), которая синтезирует ДНК на коммерческой основе. Это позволило им сшить геном вируса на 212 000 пар оснований. Вирус ввели в клетки, уже инфицированные другим поксвирусом, и они начали производить частички вируса лошадиной оспы. Затем вирус был выращен, секвенирован и охарактеризован, и имел предсказанную последовательность генома. Эту технологию описали еще в 2002 году в статье в Proceedings of the National Academy of Sciences, но применили впервые.

Джинн, выпущенный из бутылки

Лошадиная оспа безопасна для людей, не является серьезной угрозой для сельского хозяйства и к тому же считается вымершей. Однако успехи Эванса и его группы взволновали его коллег. «Если это можно проделать с лошадиной оспой, то, нет сомнений, это можно сделать и с человеческой оспой», — отметил вирусолог Герд Саттер (Gerd Sutter) из Университета Людвига Максимилиана в Германии (Ludwig-Maximilians-Universität München, LMU). ВОЗ уже назвала эксперимент канадских ученых «джинном, выпущенным из бутылки» . По мнению экспертов, возможностями биотехнологий могут воспользоваться террористы или государства-изгои. Эта работа спровоцировала возобновление споров о том, следует ли уничтожить два последних известных живых образца вариолы (Variola vera, или натуральной оспы). В 1979 году Всемирная организация здравоохранения официально объявила о победе над этой страшной болезнью методом глобальной вакцинации. Тогда же было достигнуто соглашение об уничтожении всех оставшихся образцов вируса за исключением двух, которые были переданы в секретные и надежно охраняемые лаборатории в США и России (в Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC) в Атланте и в Российский научно-исследовательский институт вирусных препаратов в Москве). Российские образцы позже были переведены в Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии в Новосибирске (в поселке Кольцово). Некоторые ученые считают, что изучение этого вируса поможет миру подготовиться к будущим вспышкам.

Джинн или добрая фея?

Впрочем, исследование Эванса является не только джинном, выпущенным из бутылки: как считает сам ученый, его эксперимент имеет и научную ценность. Отрабатывая технологии создания вирусов, ученые рассчитывают создать эффективные вакцины против различных заболеваний, научиться управлять вирусами и, возможно, разработать эффективное лекарство против рака. Фармкомпания Tonix, базирующаяся в Нью-Йорке, с которой сотрудничал Эванс, надеется использовать лошадиный вирус для усовершенствования вакцины против оспы человека. Существующая вакцина вызывают серьезные побочные эффекты у некоторых людей. По словам Эванса, синтез поксвируса, к примеру, может помочь в разработке вирусов, которые могут убивать опухоли. Ученый считает, что, конечно же, необходимо всегда помнить о «двойном назначении» подобных исследований, но при этом нужно «использовать невероятную силу этого подхода» в борьбе с опасными заболеваниями.

Лабораторные заражения: истории выпущенных из бутылок джиннов

Исследования заразных болезней всегда были опасны и иногда заканчивались трагически

• Первые случа и внутрилабораторного заражения брюшным тифом отмечены в 1885 году, сообщение о них было опубликовано К. Kisskalt (1915). В последующие годы число зарегистрированных случаев инфицирования в лабораториях возрастало , что объясняется расширением масштабов исследований с патогенными микроорганизмами во многих странах мира. К 1950 г. число документированных лабораторных заражений достигло 6000.
• Чумной форт «Император Александр I» . Широко известны две вспышки чумы в форте «Император Александр I» в Кронштадте, который использовался как лаборатория этой болезни. Несмотря на строгий контроль и все принимаемые меры безопасности, в «чумном форте» в 1904 году погиб доктор В. И. Турчинович-Выжникевич и заболел, но был вылечен фельдшер С. Поплавский, а в 1907 году погиб доктор Мануил Фёдорович Шрейбер и заболел, но был вылечен доктор Л. В. Падлевский
• Первая катастрофа в Марбурге . Официально зарегистрированная вспышка заболевания, вызванная этим вирусом, произошла в 1967 году в городе Марбург в Германии на одном из фармацевтических предприятий. Смотритель, ухаживавший за животными, умер через две недели после того, как он заметил симптомы таинственного заболевания у зеленых мартышек, привезенных в лабораторию Беринга из Центральной Африки. В лаборатории выращивали вакцину, используя клетки почек этих обезьян. Очень скоро заболели и остальные работники лаборатории. Аналогичные случаи были отмечены в лабораториях Беринга во Франкфурте и в Белграде, в которые были завезены зеленые мартышки из той же партии. Двадцать четыре человека, работавших в лаборатории, стали жертвами какого-то неизвестного заболевания, позже заболели шесть медицинских сестер, которые за ними ухаживали. Семь человек из всех заразившихся скончались.
• В 1976 году произошло внутрилабораторное заражение вирусом Эбола в Великобритании , в результате укола зараженной иглой.
• Лаборатория «Вектор». В 1988 году Государственном исследовательском центре вирусологии и биотехнологии («Вектор»), Кольцово произошло заражение сотрудника лихорадкой Марбург при проколе иглой. Заболевший сотрудник, Николай Устинов, умер.
• Второй случай внутрилабораторного заражения в «Векторе». В 1990 году заразился вирусом Марбург сотрудник лаборатории Сергей Вязунов. Предположительно, заражение произошло через глаза. Вязунов
• Внутрилабораторное заражение вирусом Эбола в Кот-д’Ивуаре . Ученый заболел после проведения вскрытия дикого шимпанзе. Пациент лечился в Швейцарии и выздоровел .
• 48 ЦНИИ МО РФ: В 1996 году умерла лаборантка вирусологического центра НИИ микробиологии МО РФ в Сергиевом Посаде, которая заразилась вирусом Эбола по неосторожности, уколов себе палец, когда делала инъекции подопытным морским свинкам.
• Форт Детрик, Мэриленд (США): В 2004 году произошло заражение сотрудника лаборатории вирусом Марбург — тоже из-за прокола иглой. В этом случае заболевший выздоровел
• Снова «Вектор». 19 мая 2004 года от лихорадки Эбола умерла Антонина Преснякова, 46-летняя старшая лаборантка отдела особо опасных вирусных инфекций НИИ молекулярной биологии Государственного научного центра вирусологии и биотехнологии «